FAQ — 最常见问题
色谱柱选型
C18A 是通用型，高保留高负载，适合大多数反相应用；C18C 耐强酸强碱（pH 1.5–12），适合苛刻流动相或小肽分离；C18D 专为亲水性化合物设计，纯水流动相超稳定，直接兼容 LC-MS，无需离子对试剂。先确定样品极性和流动相 pH，再选型号。
强烈建议在以下情况使用保护柱：① 样品基质复杂（血清、尿液、食品提取物）；② 每天进样超过 20 针；③ 样品中可能含颗粒物。保护柱可延长分析柱寿命 3–5 倍，保护柱芯更换费用远低于更换分析柱。
基础填料相同（均为 SilicaOne 定制键合硅胶），但粒径不同：分析柱用 3 μm 或 5 μm，制备柱用 10 μm 或 20 μm。粒径越大，背压越低，适合大流量制备；粒径越小，柱效越高，适合精细分析。选型时根据目标（分辨率 vs 处理量）决定。
使用与操作
是的，建议用 10–20 倍柱体积的流动相平衡色谱柱后再进样。如果柱子是用甲醇储存的，切换到水相时应先用 50% 甲醇/水 → 纯水过渡，避免直接用高水相冲洗导致 C18 链塌陷（C18D/Ami C18 例外，可直接用纯水）。
有。色谱柱柱头有箭头标记流向方向，必须按照箭头方向安装（流动相从进口端→出口端）。反向安装会导致填料松散、柱效下降、峰形变宽，且不可逆损坏。安装前检查柱头箭头方向。
① 反相柱（C18 系列）：用纯甲醇或乙腈冲洗 10 倍柱体积，排尽缓冲盐，封堵两端旋塞，室温密封保存。② HILIC 柱：用 90% 乙腈/水保存。③ Shodex SEC/GPC 柱：参照对应填料的储存溶液（通常含叠氮化钠防腐）。绝对不能用纯水长期储存反相柱。
必须！磷酸盐、醋酸铵等缓冲盐若留在柱中，会结晶堵塞柱头，或腐蚀不锈钢管路。正确步骤：① 先用 5–10% 有机相水溶液冲洗 10 min；② 再提高有机相比例至 50%；③ 最后用纯甲醇或乙腈保存。
性能与寿命
正常使用条件下，HPLCONE 分析柱可承受 2,000–5,000 针进样。影响寿命的主要因素：① 样品前处理是否充分（最关键）；② 流动相 pH 是否在允许范围内；③ 是否有保护柱；④ 每次实验后是否正确冲洗。做好前处理和保养，寿命可大幅延长。
常见原因：① 柱头积累颗粒物（最常见）；② 缓冲盐结晶堵塞；③ 蛋白质/脂质在柱头沉积；④ 流动相中有气泡。解决方法：① 先换保护柱芯；② 用强溶剂（异丙醇）反向冲洗 10 min；③ 检查样品前处理步骤。若压力仍未恢复，需更换柱头筛板。
① 检查柱温是否稳定（温度每变化 1°C，保留时间变化约 1–2%）；② 检查流动相配制是否一致（有机相比例、pH）；③ 检查色谱柱是否充分平衡（至少 10 倍柱体积）；④ 确认流速是否准确（泵校准）；⑤ 检查柱压是否正常（压力变化影响保留）。
流动相与方法
① 禁止使用磷酸盐、硼酸盐等非挥发性缓冲盐；② 推荐甲酸（0.1%）、乙酸（0.1%）、甲酸铵、醋酸铵；③ 有机相用乙腈（离子化效率更好）或甲醇；④ 选择不含离子对试剂的色谱柱（5C18D、HILIC）；⑤ 流速通常 0.2–0.4 mL/min（减少离子抑制）。
不推荐。磷酸盐用于 UV 检测效果好，但与 MS 不兼容；醋酸铵兼容 MS 但 UV 背景略高。如果同一方法需要兼容 UV 和 MS，选择醋酸铵或甲酸铵，配合 5C18D 色谱柱（无需离子对）。不同批次流动相不要混合使用，避免因比例差异导致保留时间漂移。
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