10 类常见色谱问题 · 原因与解决
可能原因
- 柱头干枯或空洞（最常见）
- 筛板堵塞导致流速分布不均
- 进样量过大（超过柱容量）
- 进样溶剂与流动相不匹配
- 柱外死体积过大（接头问题）
解决方法
- 更换保护柱芯，观察是否改善
- 强溶剂（异丙醇）冲洗再生，去除堵塞物
- 减少进样量（分析柱通常 < 10 μg）
- 进样溶剂改用弱溶剂（初始流动相）
- 检查所有接头，减少死体积
可能原因
- 碱性化合物与残余硅羟基相互作用
- 流动相 pH 未抑制碱性化合物离子化
- 柱头污染或损坏
- 进样溶剂强度过高
解决方法
- 流动相中加入三乙胺（TEA）0.1% 封盖硅羟基
- 降低流动相 pH（pH < pKa – 2），抑制碱性基团质子化
- 改用封端更完全的色谱柱（HPLCONE 完全封端）
- 用弱溶剂溶解样品
可能原因
- 柱头出现空洞（柱头坍塌）
- 进样溶剂强度远高于流动相
- 柱内填料开裂
解决方法
- 目视检查柱头：取下端头，观察填料是否有空洞；有空洞说明柱头损坏，需更换
- 改用弱溶剂（与初始流动相相似或更弱）溶解样品
- 若填料开裂，柱子需要更换
可能原因
- 柱头筛板被颗粒物堵塞
- 缓冲盐结晶析出
- 蛋白质、脂质在柱头沉积
- 流动相粘度过大（纯甲醇低温）
- 管路堵塞（非柱本身问题）
解决方法
- 先拆下色谱柱，检查系统背压是否下降；若下降，问题在柱
- 异丙醇高流速冲洗 20 min
- 更换保护柱芯或进口端筛板
- 检查样品前处理，确保 0.22 μm 过滤
- 升温（40°C）降低甲醇粘度
可能原因
- 管路接头松动或破裂泄漏
- 泵问题（单向阀损坏）
- 柱内填料流失（筛板破损）
解决方法
- 检查所有接头是否有液体渗漏
- 检查泵压力是否稳定（更换单向阀球）
- 若填料流失，检查出口端筛板是否完好
可能原因
- 流动相中有气泡
- 检测器灯老化（氘灯寿命到期）
- 流动相未充分脱气
- 梯度洗脱时有机相比例变化
- 色谱柱未充分平衡
解决方法
- 流动相用超声脱气 15 min，或在线脱气
- 检查氘灯能量值，低于阈值时更换（可更换我司兼容氘灯）
- 梯度方法先跑空白梯度，记录基线背景
- 延长平衡时间至 20–30 倍柱体积
可能原因
- 前次进样残留（交叉污染）
- 样品溶剂中含杂质
- 流动相中含微量吸收杂质
- 进样阀污染
解决方法
- 延长冲洗时间，或用强溶剂冲洗进样阀
- 检查样品溶剂空白是否干净
- 流动相改用 HPLC 级试剂
- 进样阀用异丙醇冲洗
可能原因
- 柱温不稳定
- 流动相配比不一致
- 色谱柱未充分平衡
- 泵流速不稳定
解决方法
- 使用柱温箱，固定柱温
- 精确配制流动相，使用容量瓶定容
- 每次进样前用至少 10 倍柱体积平衡
- 校准泵流速
可能原因
- 进样量不准确（进样器问题）
- 检测器灯能量不足
- 样品在进样器中损失（吸附）
- 样品浓度计算错误
解决方法
- 校验进样器进样量（用已知浓度标准品）
- 检查并更换检测器氘灯
- 更换 PEEK 进样管路，减少吸附
- 重新配制标准品验证浓度
可能原因
- 样品溶剂吸收值低于流动相（负峰）
- 溶剂折射率差异（RI 检测器）
- 进样量过大导致系统峰
解决方法
- 改用与流动相相近的溶剂溶解样品
- 减少进样量
- RI 检测器更换参比池流动相，与样品流动相一致