单抗、重组蛋白与多糖的分子量大、构象敏感,分析条件需兼顾分辨与活性保持。体积排阻、离子交换、疏水作用与宽孔反相各自反映不同的物理性质,通常组合使用。
体积排阻色谱按流体力学体积分离,是聚集体与片段定量的常用方法。Shodex SEC/GPC 柱覆盖水相与有机相体系;水相分析中盐浓度一般不低于 150 mmol/L,以抑制非特异吸附。
完整蛋白与还原后的轻重链需要 300 Å 以上孔径才能获得合理的传质与峰形。C4 或 C8 短链键合相配合较高柱温,可在保留与回收之间取得平衡。
离子交换按表面净电荷分离,用于酸性/碱性电荷变体的分辨,也用于工艺级的捕获与精纯。JNC Cellufine 纤维素基质耐碱清洗,适合需要 NaOH 在线清洗的工艺步骤。
疏水作用色谱以高盐上样、低盐洗脱,可在不使用有机溶剂的条件下获得类反相的选择性,常置于离子交换之后作为精纯步骤。脱盐与缓冲液置换可用凝胶过滤或超滤完成。
多糖、寡糖与糖醇可用配位体交换或 HILIC 模式分析。Shodex 糖类专用柱按金属离子形式区分选择性,适用于食品、发酵与生物制品中的糖谱分析。
从表征到工艺纯化的基础配置