分析色谱柱选型指南
从样品性质到型号确定的完整判定路径。含分离模式判定表、固定相选择性定位图、孔径与分子量匹配带、Van Deemter 曲线与粒径权衡、保留—pH 关系图、检测器约束表、九类应用场景速查、药典对应与放大衔接，并附计算方法与来源索引。
一、选型前需确定的条件 SELECTION INPUTS
选型是一个受约束的决策过程。在提出「用哪根柱子」之前，以下六项条件应先确定；条件不明确时，选型结果通常只能是试探性的。
| 条件 | 需要明确的内容 | 对选型的影响 |
|---|---|---|
| 样品性质 | 分子量、极性（logP）、酸碱性（pKa）、是否带电、是否含手性中心、溶解性 | 决定分离模式与固定相化学 |
| 分析目的 | 含量测定 / 有关物质 / 杂质定性 / 稳定性考察 / 制备前评估 | 决定柱效要求、载样量与柱长 |
| 基质复杂度 | 血浆、发酵液、食品提取物或纯化中间体 | 决定是否配保护柱、是否需要更强的耐污染能力 |
| 仪器条件 | 系统耐压上限、柱温箱范围、检测器类型、系统死体积 | 决定粒径下限与柱内径下限 |
| 方法归属 | 自建方法 / 药典方法 / 客户指定方法 / 需申报注册 | 决定是否需按 USP L 号选柱、是否需出厂测试报告 |
| 后续走向 | 是否放大到半制备或制备 | 决定是否选择有同相态制备规格的产品系列 |
二、分离模式判定 SEPARATION MODE
分离模式由样品的溶解性、极性与分子尺寸共同决定。下图按判定条件列出对应模式与常见固定相。多数小分子药物分析落在反相区间，但极性化合物、离子型化合物与大分子各有更合适的模式。
存在同一样品可用多种模式的情况。例如极性较强的核苷类化合物，既可用 HILIC，也可用极性嵌入型或水相稳定型反相柱。此时的选择依据通常是：与检测器的兼容性（HILIC 高有机相更利于质谱响应）、与既有方法的一致性，以及柱平衡时间（HILIC 平衡时间一般长于反相）。
三、反相固定相与选择性 STATIONARY PHASE
确定为反相之后，固定相的选择主要影响两件事：保留强度与选择性。保留强度决定组分是否落在合适的保留因子区间（一般取 k = 2–10），选择性决定相邻组分能否分开。链长（C18 / C8 / C4）主要调节保留强度，芳香与含氟相态、极性嵌入相态则用于改变选择性。
| 固定相 | 保留特点 | 适用场景 | 注意事项 |
|---|---|---|---|
| C18（ODS） | 保留强、碳载量高 | 多数小分子药物、杂质谱、食品与环境分析 | 高水相条件下部分产品存在相塌陷风险，宜选水相稳定型 |
| C8 | 保留约为 C18 的 1/2–2/3 | 强疏水化合物、需缩短分析时间 | 选择性与 C18 接近，改善分离度的作用有限 |
| C4 | 保留弱 | 多肽、蛋白、大分子 | 小分子上易保留不足 |
| 苯基 / 联苯基 | π–π 作用带来芳香选择性 | 芳香族结构类似物、位置异构体 | 与含大量乙腈的流动相配合时选择性会减弱，甲醇体系更明显 |
| 五氟苯基 PFP | 偶极、π–π、空间位阻多重作用 | 卤代化合物、极性异构体、碱性化合物 | 选择性对流动相组成较敏感，方法转移时需复核 |
| 极性嵌入 / 水相稳定型 | 在酰胺、氨基甲酸酯等极性基团处形成水化层 | 100% 水相、极性化合物、碱性化合物峰形改善 | 疏水保留略低于同碳数常规 C18 |
| 氰基 CN | 中等极性，可用于正相与反相 | 快速筛选、正相分离 | 批间重现性一般低于 C18，方法验证需关注 |
| 氨基 NH₂ / 二醇 Diol | 极性作用为主 | 糖类、正相分离、HILIC 模式 | 氨基相与还原糖、醛酮类可能发生反应，寿命较短 |
相态与站内在售型号的对应
下表把上述相态类别与站内三条产品线对应起来：COSMOSIL 为 Nacalai Tesque 分析柱，特殊选择性相态较齐全；HPLCONE 为自有品牌，基于 SilicaOne 定制键合硅胶，分析至制备规格连续并标注 USP L 号；Daisogel 为大阪曹达散装球形硅胶，用于自装柱与工业制备。
| 相态类别 | COSMOSIL（分析柱） | HPLCONE（分析 / 制备） | Daisogel（散装硅胶） |
|---|---|---|---|
| C18 通用 | 5C18-MS-II（完全封端）、5C18-AR-II（部分封端，选择性互补） | 5C18A（比表面积 300 m²/g，高保留高负载） | SP-120-ODS-RPS（碳载 17%）、SP-100-ODS-HP（碳载 24%） |
| C18 耐酸碱 | — | 5C18C（pH 1.5–12，可用 NaOH 再生） | SP-120-ODS-BIO（碳载 20%，可碱再生） |
| C18 亲水 / 水相稳定 | 5C18-PAQ | 5C18D（LC-MS 亲水型）、Ami C18（酰胺极性嵌入） | SP-60-ODS-RPS（60 Å，比表面积 450 m²/g） |
| C8 | 5C8-MS | C8 系列 | SP-120-C8-P、SP-200-C8-BIO |
| C4 / 大分子反相 | 5C4-MS、5C18-AR-300、5C8-AR-300（300 Å） | — | SP-300-C4-BIO（碳载 3%）、SP-300-ODS-BIO（碳载 8%） |
| 苯基 / 芳香选择性 | 5PE-MS（苯基）、πNAP（萘乙基）、5PYE（芘乙基）、PBr（五溴苯基）、PFP（五氟苯基） | PE 苯基（USP L11） | SP-120-C4Ph-HP（苯基） |
| 形状选择性 | Cholester（胆甾醇基）、5C22-AR-II（C22） | — | — |
| 氰基 CN | 5CN-MS | — | — |
| 氨基 / 糖类 | — | NH PLUS（聚合物基质氨基，USP L8）、SUGAR-Ca / SUGAR-H | SP-120-APS-P（氨丙基） |
| HILIC | HILIC | HILIC（USP L114 / L122） | — |
| 硅胶 / 正相 | 5SL-II | SIL（USP L3，比表面积 320 m²/g） | SP-120-P、SP-1000-P 等全孔径 |
| 手性 | CHiRAL 3A / 3B / 3C、5A / 5B / 5C | — | — |
四、基质、键合与封端 SILICA & BONDING
同为「C18」，不同产品的峰形与寿命差异往往来自基质与键合工艺，而不是碳链本身。以下四项参数在产品说明书中通常可查，选型时值得逐项比对。
| 参数 | 取值范围 | 影响 |
|---|---|---|
| 硅胶纯度 | 普通硅胶 / 高纯硅胶（金属杂质 ppm 级） | 金属残留会与螯合性化合物作用，造成拖尾与响应下降 |
| 封端处理 | 完全封端 / 部分封端 / 不封端 | 残余硅羟基与碱性化合物作用引起拖尾；不封端产品在高水相下的保留行为不同 |
| 键合方式 | 单官能团 / 双官能团 / 三官能团 | 多官能团键合的耐酸性较好，单官能团键合层结构较均一 |
| pH 耐受 | 常规 2–8；耐碱型可达 12；杂化或聚合物基质更宽 | 决定可用的流动相 pH 范围与清洗方式 |
| 碳载量 | 约 7%–20%（随孔径与链长变化） | 与保留强度正相关，但不宜跨孔径直接比较 |
| 耐温上限 | 常规 60 ℃；部分产品 80 ℃ | 高柱温可降黏度、提高柱效，但会加速硅胶溶解 |
在 pH 边界附近工作时，硅胶基质的水解与键合相流失是柱寿命下降的主要途径之一。pH 低于 2 时键合相易水解脱落，pH 高于 8 时硅胶骨架溶解速率上升。若方法要求在 pH 9–12 运行，应选择耐碱型键合硅胶、杂化基质或聚合物基质；同时降低柱温可减缓劣化。
五、孔径与分子量匹配 PORE SIZE
孔径决定溶质能否自由进出孔道。当分子尺寸接近孔径时，传质受阻，表现为峰展宽与柱效下降。一般要求孔径至少为溶质回转直径的 3 倍以上。下图给出常用对应关系。
站内可选孔径档与比表面积
孔径增大时比表面积随之下降，保留能力与载样量也相应下降。Daisogel 散装硅胶的孔径档与对应参数如下，可作为按孔径选型的参照；COSMOSIL 与 HPLCONE 分析柱多集中在 90–130 Å 区间，另有 300 Å 规格用于蛋白与大肽。
| 孔径 | 比表面积 | 孔体积 | ODS 碳载量* | 适用 |
|---|---|---|---|---|
| 60 Å | 450 m²/g | 0.75 mL/g | 19%（RPS） | 小分子、合成肽，载样量要求较高的场合 |
| 100 Å | 320 – 450 m²/g | 0.9 – 1.1 mL/g | 17%（P）／24%（HP） | 通用反相 |
| 120 Å | 300 m²/g | 1.0 – 1.1 mL/g | 17%（RPS）／20%（BIO） | 通用反相主力档 |
| 200 Å | 200 m²/g | 1.1 mL/g | 12%（RPS）／15%（BIO） | 中等分子量多肽 |
| 300 Å | 100 m²/g | 0.9 mL/g | 8%（BIO） | 蛋白、大肽、寡核苷酸 |
| 1000 Å | 25 m²/g | 0.9 mL/g | — | 大分子、聚合物 |
| 2000 Å | 15 m²/g | 0.8 mL/g | — | 超大分子 |
SEC 模式的孔径选择规则与反相不同：SEC 依靠孔径分布实现分离，需要待测分子落在该柱的分离范围（校正曲线的线性段）内，而不是「孔径越大越好」。分子量分布较宽的样品可采用不同孔径柱串联。
六、粒径、柱长与背压权衡 GEOMETRY & EFFICIENCY
柱效随粒径减小而提高，背压则随粒径平方反比上升。选粒径实际上是在分离能力、分析时间与系统耐压三者之间取平衡。下图为不同粒径的塔板高度—线速度关系（Van Deemter 曲线）。
| 粒径 | 常配柱长 | 典型背压（4.6 mm × 150 mm，1.0 mL/min） | 适用 |
|---|---|---|---|
| 10 μm | 250 mm | 约 30–60 bar | 常规检测、教学、半制备 |
| 5 μm | 150 / 250 mm | 约 80–150 bar | 覆盖多数分析场景，药典方法常用 |
| 3 μm | 100 / 150 mm | 约 200–350 bar | 缩短分析时间、复杂杂质谱 |
| < 2 μm | 50 / 100 mm | 常需 600 bar 以上系统 | UHPLC 平台，系统死体积需同步优化 |
由上式可知：柱长加倍可使柱效加倍，但分辨率仅提高约 1.4 倍，同时背压与分析时间也加倍。粒径由 5 μm 降到 3 μm，在相同柱长下柱效提高约 1.7 倍，背压提高约 2.8 倍。因此在系统耐压允许时，缩小粒径通常比延长柱长更有效率。
| 柱内径 | 常用流速 | 相对灵敏度* | 适用 |
|---|---|---|---|
| 4.6 mm | 0.8 – 1.5 mL/min | 1.0（基准） | 常规分析，药典方法多用此规格 |
| 3.0 mm | 0.4 – 0.7 mL/min | 约 2.4 | 节省溶剂，兼容常规 HPLC |
| 2.1 mm | 0.2 – 0.4 mL/min | 约 4.8 | LC-MS 首选，需低死体积系统 |
| 1.0 mm 及以下 | < 0.1 mL/min | 约 21 | 微量样品，对系统要求高 |
七、流动相与 pH 选择 MOBILE PHASE & pH
对可解离化合物，流动相 pH 对保留的影响通常大于有机相比例的影响。下图为酸性与碱性化合物的保留随 pH 变化的一般形态。
为使保留稳定，流动相 pH 一般应偏离待测物 pKa 两个单位以上，使其处于单一存在形态。落在 pKa ± 1 区间时，保留时间对 pH 波动敏感，方法耐用性下降。
| 缓冲体系 | 有效 pH 区间 | MS 兼容 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 磷酸 / 磷酸盐 | 1.9–3.1；6.2–8.2 | 否 | 紫外末端吸收低，药典方法常用；不可用于 MS 与 ELSD |
| 甲酸 / 甲酸铵 | 2.8–4.8 | 是 | LC-MS 常用，正离子模式响应良好 |
| 乙酸 / 乙酸铵 | 3.8–5.8 | 是 | 适用范围较宽，正负离子模式均可 |
| 碳酸氢铵 | 9.2–10.2 | 是 | 用于碱性条件 MS 方法，需耐碱型色谱柱 |
| 三氟乙酸 TFA | 约 2.0 | 受限 | 改善多肽峰形，但抑制 ESI 响应，定量方法需评估 |
有机改性剂方面，乙腈的洗脱强度高于甲醇、黏度较低，产生的背压更小；甲醇的氢键作用可提供不同选择性，在苯基柱上尤为明显。方法开发阶段可将两者作为独立变量分别筛选。
八、检测器带来的约束 DETECTOR CONSTRAINTS
检测器决定流动相中哪些成分不可使用，这一约束通常先于色谱柱选择成立。若在方法开发后期才发现流动相与检测器不兼容，往往需要重新选柱。
| 检测器 | 流动相限制 | 选柱倾向 | 说明 |
|---|---|---|---|
| UV / DAD | 需在检测波长处透明；乙腈末端吸收低于甲醇 | 无特殊限制 | 低波长检测（< 210 nm）时避免使用含羰基溶剂与 TFA |
| 荧光 FLD | 避免荧光淬灭剂 | 与衍生化方案匹配 | 氨基酸 OPA / FMOC 衍生后检测，灵敏度高于 UV |
| 示差折光 RI | 仅可等度洗脱，柱温与室温需稳定 | 糖类专用柱、SEC 柱 | 梯度会导致基线漂移，不可用 |
| 蒸发光散射 ELSD / CAD | 流动相需完全挥发，禁用磷酸盐 | 反相或 HILIC 均可 | 响应与浓度呈非线性，定量需用对数拟合或窄范围标曲 |
| 质谱 MS | 禁用非挥发性盐；离子对试剂会抑制响应 | 2.1 mm 内径柱、MS 兼容相态 | 甲酸铵、乙酸铵体系为常规选择；TFA 需评估抑制程度 |
| 电导 / 抑制型 | 需配套淋洗液体系 | 离子色谱专用柱 | 无机阴阳离子分析 |
九、应用场景与站内产品对应 APPLICATION MATRIX
下表按样品类别给出常用起点。表中型号为站内在售系列，实际选型仍需按第一章的条件复核。
| 样品类别 | 推荐起点 | 流动相体系 | 备选与说明 |
|---|---|---|---|
| 多肽 · 小肽 | HPLCONE 5C18A（高负载）／5C18C（耐酸碱）；制备用 Daisogel SP-120-ODS-RPS | 0.1% TFA 或甲酸 / 乙腈梯度 | 大分子多肽改用 C4 或 300 Å 孔径；制备阶段关注载样量 |
| 药物有关物质 | COSMOSIL 5C18-MS-II 或 HPLCONE 5C18A，5 μm × 150 mm | 缓冲盐 / 乙腈梯度 | 共流出组分改用苯基或 PFP；申报方法需固定品牌与批号信息 |
| 糖类 · 蜂蜜 | HPLCONE SUGAR-Ca（钙型）／SUGAR-H（氢型） | 纯水或稀硫酸，等度 | RI 检测，柱温 60–80 ℃；氢型可同时分离有机酸 |
| 氨基酸 | HPLCONE 5C18D + 柱前衍生（OPA / FMOC） | 缓冲盐 / 乙腈梯度 | 手性构型分析可用手性衍生试剂，无需手性柱 |
| 核苷酸 · 低聚糖 | HPLCONE 5C18D、COSMOSIL 5C18-PAQ 或 HILIC 相 | 高水相或高乙腈相 | 亲水型 C18 可在纯水流动相下稳定保留，便于 MS 联用 |
| 极性代谢物（LC-MS） | COSMOSIL HILIC 或 HPLCONE HILIC（两性离子） | 乙腈 / 乙酸铵梯度 | 平衡时间较长，序列开始前需充分平衡 |
| 芳香族 · 多环芳烃 | COSMOSIL 5PYE / πNAP / PBr；常规芳香族可用 HPLCONE PE 苯基 | 甲醇 / 水或乙腈 / 水 | π–π 作用提供与 C18 互补的选择性 |
| 蛋白分子量分布 | Shodex 水系 SEC 系列（按分离范围选孔径） | 磷酸盐缓冲液，等度 | 保持温和条件以维持天然构象；避免与柱基质产生非特异吸附 |
| 手性药物 | COSMOSIL CHiRAL 3A–3C / 5A–5C；制备可选 ChiralONE 系列 | 正相、反相或极性有机模式 | 先做流动相模式筛选，再固定相态；键合型耐溶剂范围更宽 |
COSMOSIL — 特殊选择性相态
COSMOSIL 由 Nacalai Tesque 生产，麦可旺志为中国大陆代理。除常规 C18 / C8 / C4 外，该系列在芳香与形状选择性相态上型号较多，适合 C18 无法分开的结构类似物。
| 型号 | 固定相 | 作用机理 | 典型用途 |
|---|---|---|---|
| 5C18-MS-II | ODS，完全封端 | 疏水 | 通用分析，碱性化合物峰形较好 |
| 5C18-AR-II | ODS，部分封端 | 疏水 + 残余硅羟基作用 | 与 MS-II 形成互补选择性 |
| 5C18-PAQ | 水相稳定 ODS | 疏水，高水相不塌陷 | 极性化合物、100% 水相条件 |
| 5C22-AR-II | C22 | 疏水 + 形状选择性 | 长链与构型异构体 |
| Cholester | 胆甾醇基 | 形状选择性 | 脂溶性维生素、甾体类 |
| πNAP | 萘乙基 | π–π | 芳香族位置异构体 |
| 5PYE | 芘基乙基 | π–π + 色散力 | 多环芳烃、富勒烯相关分离 |
| PBr | 五溴苯基 | 疏水 + 色散力 | 卤代化合物、甾体 |
| PFP | 五氟苯基 | π–π + 偶极 | 卤代物、极性异构体 |
| 5PE-MS | 苯基 | π–π | 芳香族化合物 |
| 5C18-AR-300 / 5C8-AR-300 | 300 Å 宽孔 ODS / C8 | 疏水 | 蛋白与大分子肽 |
| CHiRAL 3A–3C / 5A–5C | 多糖类手性相 | 手性识别 | 对映体分离 |
HPLCONE — 自有品牌，标注 USP L 号
HPLCONE 使用自研 SilicaOne 定制键合硅胶（金属杂质总量 < 10 ppm），分析柱与制备柱规格连续，多款标注了对应的 USP 填料代号，便于药典方法选柱。
| 型号 | USP 代号 | 特点 | 适用 |
|---|---|---|---|
| 5C18A | L1 | 比表面积 300 m²/g，孔径 12 nm，pH 2–10，100% 水相可用 | 多肽、抗生素、天然产物，兼顾保留与载样量 |
| 5C18C | L1 | 高密度键合与完全封尾，pH 1.5–12，可用 NaOH 再生 | 小肽分离、酸碱条件较苛刻的方法 |
| 5C18D | L1 | 亲水键合，纯水体系不塌陷，无需离子对添加剂 | 低聚糖、氨基酸、核苷酸、有机酸，LC-MS 联用 |
| Ami C18 | L60 / L1 | 酰胺极性嵌入，多模式作用 | 酸类、胺类、酚类等 C18 保留不足的化合物 |
| PE 苯基 | L11 | π–π 作用 | 芳香族与结构类似物 |
| SIL | L3 | 球形全多孔超纯硅胶，比表面积 320 m²/g | 正相分离 |
| NH PLUS | L8 | 聚合物基质键合氨基，耐碱清洗 | 糖类定量 |
| HILIC | L114 / L122 | 两性离子亲水相 | 极性化合物、代谢组学、糖肽 |
| SUGAR-Ca / SUGAR-H | L19 / L17 | 配体交换，纯水流动相，柱温 60–80 ℃ | 蜂蜜与食品糖类；氢型可同时检测有机酸 |
Daisogel — 散装硅胶，用于自装与放大
Daisogel 为大阪曹达球形硅胶，麦可旺志为中国区总代理。型号按「孔径 – 粒径 – 官能团 – 等级」组合，孔径 60–2000 Å、粒径 3–50 μm，同一相态可从分析级粒径连续覆盖到工业制备粒径，便于方法放大时保持选择性。
| 等级 | 特点 | 适用 |
|---|---|---|
| P | 常规键合，通用 | 多数常规分离 |
| RPS | 高键合密度、封端较完全 | 通用反相主力，SP-120-ODS-RPS 碳载 17% |
| HP | 高碳载量 | 保留与载样量要求较高，SP-100-ODS-HP 碳载 24% |
| BP | 碳载量较低、极性略强 | 与 RPS 形成选择性差异 |
| BIO | 改良硅胶，pH 耐受范围较宽，可用 NaOH 再生 | 多肽与蛋白纯化、需要碱洗再生的工艺 |
| PK | 旗舰级，批次一致性要求较高 | 注册工艺与长期供货 |
十、药典方法与合规选型 PHARMACOPOEIA
执行药典方法时，色谱柱的选择受药典条文约束。各国药典以「填料代号」而非品牌指定柱子，同一代号下允许更换产品，但更换后需通过系统适用性试验。
| 体系 | 指定方式 | 可调整范围 |
|---|---|---|
| USP | 以 L 号指定填料类别（如 L1 为十八烷基硅烷键合硅胶，L7 为辛基，L11 为苯基，L3 为硅胶，L10 为氰基，L8 为氨基） | 依据 USP 通则 <621>，等度方法中柱长与粒径可在使 L/dp 处于 −25% 至 +50% 的范围内调整；梯度方法的调整限制更严 |
| ChP（中国药典） | 通则 0512 规定色谱条件与系统适用性要求 | 色谱柱填料类别与流动相组成的调整需符合通则规定，并重新进行系统适用性试验 |
| EP | 以填料描述指定 | 调整范围见通则 2.2.46 相关条款 |
系统适用性通常包含理论塔板数、拖尾因子、分离度与重复性四项。更换色谱柱后这四项均应复测并记录。用于注册申报的方法，建议同时保留所用色谱柱的品牌、型号、批号与出厂测试报告。
十一、放大到制备的衔接 SCALE-UP
若分析方法后续需放大到半制备或制备，选型阶段就应考虑衔接问题。以下三点在分析阶段确定，可减少放大时的返工。
| 事项 | 分析阶段的做法 | 放大时的收益 |
|---|---|---|
| 相态可获得性 | 选择同时具备 10 μm、20 μm 制备规格的相态系列 | 放大时保持相同选择性，无需重新开发方法 |
| 流动相可放大性 | 避免使用磷酸盐等难以回收的非挥发性盐 | 降低后续脱盐与溶剂回收成本 |
| 载样条件 | 记录过载临界点（进样量—峰高线性偏离点） | 放大时按填料质量等比换算，产能估算有据 |
在相态可获得性方面，Daisogel 同一孔径与官能团组合可在 3、5、10、15、20、30、40、50 μm 等粒径档之间选择，分析阶段用小粒径确认选择性、制备阶段换用大粒径而保持相同键合相，可减少放大时重新筛选相态的工作量。HPLCONE 分析柱与制备柱使用同一 SilicaOne 基质，规格从 4.6 mm 内径延伸至 20 mm 及定制尺寸。
放大后的装填与验收要求见 分析色谱柱装填、DAC 装填支持 与 DAC 装柱问题诊断。
十二、选型自查清单 CHECKLIST
| 序号 | 检查项 | 不通过时的处理 |
|---|---|---|
| 1 | 分离模式与样品极性、分子量、电荷状态一致 | 回到第二章重新判定 |
| 2 | 目标组分的 k 落在 2–10 区间 | 调整有机相比例；仍偏离则更换链长 |
| 3 | 关键组分对的分离度 ≥ 1.5 | 优先更换固定相选择性，其次调整梯度 |
| 4 | 流动相 pH 偏离待测物 pKa 两个单位以上 | 调整 pH 或改用离子对、HILIC 模式 |
| 5 | 流动相 pH 在所选柱的耐受范围内 | 改用耐碱型、杂化基质或聚合物基质 |
| 6 | 孔径与样品分子量匹配 | 按第五章调整孔径 |
| 7 | 预计背压不超过系统上限的 80% | 增大粒径、缩短柱长或降低流速 |
| 8 | 流动相与检测器兼容 | 更换缓冲体系，必要时重选相态 |
| 9 | 基质复杂样品已配保护柱 | 补配同相态保护柱柱芯 |
| 10 | 药典方法已核对 L 号与系统适用性要求 | 查 药典专区 并复测四项指标 |
| 11 | 若需放大，已确认同相态制备规格可获得 | 更换为具备制备规格的相态系列 |
附录 A 计算方法与假设 METHODS & ASSUMPTIONS
本页涉及的计算式如下，供核对与复算。式中符号：tR 保留时间，t0 死时间，W1/2 半峰宽，L 柱长，dp 粒径，dc 柱内径，ε 柱内总孔隙率（估算取 0.65），F 流速。
文中给出的背压区间按流动相为乙腈/水（约 50:50，25 ℃，黏度约 0.8 mPa·s）估算，随流动相组成、柱温与填料批次存在偏差，用于选型初判而非验收依据。相对灵敏度按等量进样、峰体积与柱截面积成反比推算，未计入系统展宽与进样体积上限，实测值一般低于推算值。
孔径与分子量的对应区间为常规经验取值（本页推断，无统计来源）；固定相定位图中的坐标位置表示相对关系，不代表任何产品的实测参数。
附录 B 参考来源索引 REFERENCES
本页内容依据以下公开资料与站内既有数据整理。药典条文以现行版为准，引用时请核对最新版本。
| 药典与法规 | ||
| [1] | USP 通则 <621> Chromatography（色谱法），含填料 L 号分类与方法调整允许范围 | usp.org |
| [2] | USP 通则 <1225> Validation of Compendial Procedures | usp.org |
| [3] | 《中华人民共和国药典》2020 年版 四部 通则 0512 高效液相色谱法 | chp.org.cn |
| [4] | European Pharmacopoeia 2.2.29 液相色谱法；2.2.46 色谱分离技术 | edqm.eu |
| [5] | ICH Q2(R2) Validation of Analytical Procedures | ich.org |
| [6] | ICH Q3A(R2) / Q3B(R2) 新原料药与新制剂中的杂质 | ich.org |
| [7] | ICH Q14 Analytical Procedure Development | ich.org |
| 专著与方法学 | ||
| [8] | Snyder L.R., Kirkland J.J., Dolan J.W. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3rd ed., Wiley | — |
| [9] | Snyder L.R., Kirkland J.J., Glajch J.L. Practical HPLC Method Development, 2nd ed., Wiley | — |
| [10] | Neue U.D. HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH | — |
| [11] | Guiochon G. et al. Fundamentals of Preparative and Nonlinear Chromatography, 2nd ed., Academic Press | — |
| [12] | van Deemter J.J., Zuiderweg F.J., Klinkenberg A. Chem. Eng. Sci., 1956, 5, 271 — 塔板高度与线速度关系 | — |
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| [14] | IUPAC Recommendations, Nomenclature for Chromatography (Pure Appl. Chem., 1993, 65, 819) | iupac.org |
| 产品与站内资料 | ||
| [15] | COSMOSIL 色谱柱技术资料（Nacalai Tesque） | nacalai.co.jp |
| [16] | Daisogel 色谱硅胶产品资料（大阪曹达 DAISO） | daiso-chem.co.jp |
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